實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是分子生物學(xué)中一種強(qiáng)大的工具,其用于定量檢測(cè)特定DNA或RNA分子的擴(kuò)增過(guò)程的技術(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀則是執(zhí)行這一技術(shù)的平臺(tái),它通過(guò)增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)了對(duì)PCR擴(kuò)增過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)控。在擴(kuò)增時(shí),引物利用同位素或熒光素進(jìn)行標(biāo)記,與熒光探針和模板特異性結(jié)合進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增信號(hào)通過(guò)實(shí)時(shí)采集系統(tǒng)輸送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析處理,最終得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果。
一、日常清潔與保養(yǎng)
儀器表面清潔
定期用軟布蘸取少量清水擦拭儀器表面,清洗后擦干。
若試劑泄漏,需用70%酒精擦拭干凈,避免腐蝕性液體接觸儀器。
注意:清潔前必須關(guān)閉電源并拔掉電源線,禁止使用強(qiáng)腐蝕性或有機(jī)溶劑。
反應(yīng)孔(樣品孔)清潔
灰塵或雜質(zhì)會(huì)影響PCR擴(kuò)增和熒光檢測(cè),需每3個(gè)月清潔一次。
方法:用吹氣球或洗耳球輕輕吹拭孔內(nèi)灰塵;若孔內(nèi)有熒光物質(zhì)污染,可用移液槍吸取90%酒精浸泡20分鐘,吸出酒精后自然風(fēng)干或電吹風(fēng)吹干。
防護(hù):不使用時(shí)關(guān)閉滑蓋,防止灰塵進(jìn)入。
熱蓋清潔
熱蓋需用酒精或純水定期擦拭,確保溫控性能良好,避免影響反應(yīng)溫度均勻性。
二、操作規(guī)范與注意事項(xiàng)
開關(guān)機(jī)頻率
避免頻繁開關(guān)儀器,兩次開關(guān)間隔時(shí)間不低于30秒。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,保持待機(jī)狀態(tài)10分鐘(內(nèi)部風(fēng)扇持續(xù)工作),待模塊溫度降至室溫后再關(guān)閉電源,防止熱應(yīng)力損傷。
電源與連接
使用原廠商提供的電源線和通訊線,避免與其他大功率設(shè)備共用插座,防止電壓波動(dòng)影響運(yùn)行。
建議通過(guò)穩(wěn)壓器和UPS(不間斷電源)連接電源,保護(hù)電路并確保試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。
耗材使用
選用熱密封性好的PCR管,避免側(cè)壁和管蓋帶有記號(hào)筆標(biāo)記(如需標(biāo)記,僅限8聯(lián)管兩端),防止熒光信號(hào)干擾。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)取出PCR管,避免溫度下降導(dǎo)致管蓋冷縮,氣溶膠溢出污染儀器。
三、環(huán)境管理
溫濕度控制
環(huán)境溫度建議18℃-35℃,濕度0-85%。溫度過(guò)低可能導(dǎo)致檢測(cè)無(wú)效(如0℃以下時(shí)陽(yáng)性對(duì)照陰性)。
避免儀器暴露于潮濕、高溫或腐蝕性氣體環(huán)境中。
防塵與防干擾
儀器應(yīng)放置在灰塵較少、遠(yuǎn)離水源和熱源的地方,無(wú)強(qiáng)磁場(chǎng)干擾。
多臺(tái)儀器同時(shí)使用時(shí),保持間距≥50cm,降低相互影響。
四、定期維護(hù)與校準(zhǔn)
軟件更新與校準(zhǔn)
定期檢查制造商網(wǎng)站,下載并安裝最新軟件版本,修復(fù)漏洞并提升性能。
根據(jù)儀器型號(hào),每半年至一年進(jìn)行一次熒光校正(如ABI品牌儀器),確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
溫控系統(tǒng)檢查
定期驗(yàn)證溫度控制的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,若發(fā)現(xiàn)溫度偏差(如各孔平均溫度差>1-2℃),需聯(lián)系專業(yè)人員調(diào)整或維修。
濾芯更換
根據(jù)使用頻率,定期更換空氣濾芯,防止灰塵進(jìn)入儀器內(nèi)部,延長(zhǎng)電子元件壽命。